Методы лабораторных исследований гепатита с


О лабораторных исследованиях

Мы проводим исследования крови на:

  • ВИЧ
  • Гепатит В
  • Гепатит С
  • Сифилис

Преаналитический этап

1

При исследовании на инфекционные маркеры необходимо соблюдать все правила преаналитического этапа, который включает в себя комплекс мероприятий, выполняемых от назначения на инфекционные маркеры до осуществления лабораторных измерений взятого биоматериала.

Преаналитический этап-это условия, в которых находится пациент перед взятием у него биоматериала, его первичной обработки, хранения и доставки в лабораторию. Соблюдение правильного проведения преаналитического этапа важно, так как  до 60% погрешностей в КДЛ по России приходится на преаналитический этап.

Преаналитический этап включает:

  • правильное взятие биоматериала
  • хранение
  • транспортировка

Образец крови для теста на ВИЧ должен забирать квалифицированный сотрудник с применением во всех случаях «универсальных мер предосторожности» против случайной передачи вируса.

При исследовании в цельной крови, сыворотке или плазме образец крови берут чаще всего из локтевой вены. При плановом назначении лабораторного теста кровь для его выполнения следует брать натощак (после примерно 12ч. голодания и воздержания от приема алкоголя и курения), при минимальной физической активности непосредственно перед взятием (в течение 20-30 мин), в положение пациента лежа или сидя.

Взятие венозной крови облегчается применением вакуумных пробирок. Под влиянием вакуума кровь из вены быстро поступает в пробирку, что упрощает процедуру взятия и сокращает время наложения жгута.

В зависимости от назначенного вида исследования образец крови должен собираться при наличии строго определённых добавок. Для получения плазмы кровь собирают с добавлением антикоагулянтов: этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), цитрата, оксалата, гепарина. Для исследований системы свертывания крови применяется только цитратная  плазма. В большинстве гематологических исследований используют венозную кровь с солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, К2 или К3-ЭДТА). Взятие биоматериала для иммуносупрессантов (такролимус и циклоспорин)  проводят в пробирке с ЭДТА, К2 до верхней метки, содержимое пробирки незамедлительно, с осторожным переворачиванием 5-10 раз, перемешать.

1

Для предупреждения контаминации (механический перенос инфекционного агента из одного образца в другой) необходимо строго соблюдать правила забора биоматериала  и его транспортировки.

Доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в контейнерах, биксах или сумках-холодильниках. Доставляемые емкости с жидкими материалами должны быть закрыты пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортировки. Дно контейнеров содержащих емкости с ПБА (микроорганизмы 3,4 групп патогенности), должно быть покрыто адсорбирующим материалом, контейнера, биксы или сумки-холодильники должны быть промаркированы и иметь международный знак «Биологическая опасность».

Доставка образцов крови происходит с соблюдением всех этапов холодовой цепи. Холодовая цепь – это соблюдение температурного режима от момента взятия биоматериала до лабораторного тестирования.

Пробирки с образцами крови после оседания эритроцитов или оседания сгустка крови (не ранее чем через 30мин.  после взятия крови) подвергаются центрифугированию. Кровь для получения сыворотки или плазмы центрифугируют в течение 10-15 мин при  800-1600 х g .

Забор крови при ПЦР исследовании, как правило, проводят с использованием антикоагулянтов (веществ, препятствующих свертыванию крови).  Важно помнить, что некоторые антикоагулянты являются эффективными ингибиторами ПЦР и их использование крайне нежелательно (например, гепарин). Другим неприятным ингибитором ПЦР является гемоглобин цельной крови (гемолиз).

При ПЦР исследовании кровь с ЭДТА может храниться  при  температуре +2+30 c до 72 часов со времени сбора, после этого может храниться ещё два дня при +2+8 c. Для хранения более пяти дней отделить плазму от красных клеток крови центрифугированием при  800-1600 х g в течение 20минут. После отделения плазмы она может храниться при +2+8º ещё семь дней. Также плазма может храниться при -20C длительное время.

Несоблюдение правил преаналитического этапа приводит к возникновению неспецифических реакций.

Общие правила по подготовке к исследованиям на ВИЧ-инфекцию, вирусный гепатит В (HbSAg), вирусный гепатит С, сифилис.

  1. кровь сдавать утром натощак;
  2. исключить физические нагрузки в течение 24 часов;
  3. накануне избегать пищевых нагрузок;
  4. исключить курение минимум за 2 часа до исследования;
  5. исключить приём алкоголя накануне исследования;
  6. при себе иметь паспорт или заменяющий его документ с фотографией.

Забор крови проводится с 8-00 до 12-00 ч.,

адресу: г. Симферополь, ГБУЗ РК «Центр крови», ул. Киевская 37/2

Результат выдается на следующей день, после сдачи крови.

Выдача результата с 14-00 -16-00ч. При себе иметь паспорт.

Вич-инфекция

1

ВИЧ-инфекция — болезнь, вызванная вирусом иммунодефицита человека-антропонозное инфекционное хроническое заболевание, характеризующееся специфическим поражением иммунной системы, приводящим к медленному ее разрушению до формирования синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД).

Возбудитель ВИЧ-инфекции — вирус иммунодефицита человека — относится к семейству ретровирусов. Вирус преимущественно поражает клетки иммунной системы-Т-лимфоциты, называемые СD4 Т-клетками.  СD4 Т-клетки — это субпопуляция лимфоцитов, которая выполняет важнейшие функции в регуляции и осуществлении иммунного ответа организма против бактерий, вирусов и других микроорганизмов. В клетке человека вирус образует участок ДНК, встраивает его в геном хозяина.  Пораженная вирусом клетка производит материалы для построения вирусных частиц,  на ее поверхности появляются антигены вируса. При делении дочерние клетки получают вирусную ДНК.

К антигенам вируса, расположенным на поверхности клеток, вырабатываются антитела, которые используются для диагностики инфекции. В настоящее время известны 2 типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Считают, что ВИЧ-2 имеет меньшую способность к распространению и медленнее разрушает иммунную систему.

1

Источником ВИЧ-инфекции является человек. Почти во всех биологических жидкостях инфицированного человеческого организма (кровь, сперма, грудное молоко, влагалищный и цервикальный секрет) в различной концентрации обнаруживаются вирусные частицы.

Основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к вирусу с помощью иммуноферментного анализа. Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% — через 6 месяцев от момента заражения и у 0,5-1 %- в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител-2 недели от момента заражения.

В терминальной стадии СПИД количество антител может значительно снижаться, вплоть до полного их исчезновения. Серологическая диагностика инфекции ВИЧ на первом этапе строится на выявлении суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с помощью твердофазного анализа. На втором этапе методом иммунного блотинга проводится определение антител к отдельным белкам вируса.

1

Забор крови производится  ежедневно, кроме субботы и воскресенья, в процедурном кабинете Центр крови с 8.00 до 12.00 часов при наличии паспорта. Результат анализа – на следующий день после 14.00. Если Ваш результат задержан, то срок его исполнения переносится на 3 рабочих дня. 

Гепатит С

1

Гепатит С — вирусное заболевание , характеризующееся поражением печени и аутоиммунными нарушениями, часто имеющее первично-хроническое и латентное течение. Протекает в желтушной (5%) или безжелтушной (95%) формах. Вирус гепатита С относится к семейству флавивирусов, представляет собой небольшой(40-50нм в диаметре), покрытый оболочкой вирус, достаточно устойчивый во внешней среде. Его геном представлен одноцепочечной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков вируса. К структурным относятся нуклеокапсидный белок(С-core) и гликопротеины оболочки(Е1-Е2). Неструктурную область представляет комплекс белков с ферментативной активностью(NS1,NS2, NS3, NS4,NS5).

Высокая  степень генетической изменчивости ВГС способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в лабораторной диагностике (серонегативный гепатит С).

Протекая бессимптомно,  долгие годы остающейся нераспознанной, именно ВГС-инфекция является основной причиной формирования всей группы хронических болезней печени — хронического гепатита, цирроза, гепатоцеллюлярной карциномы.

Источниками ВГС являются больные всеми формами острого и хронического гепатита С.  Вирус попадает в кровь при любых  парентеральных манипуляциях: гемотрансфузии, инъекциях, при посещении  стоматолога и гинеколога,  оперативных вмешательствах, зондовом обследовании и т.д. К группе риска относятся больные,  находящиеся на гемодиализе, страдающие гемофилией и другими заболеваниями крови, получающие плазму, гемоконцентраты, иммуноглобулины. Наркоманы, употребляющие наркотики внутривенно.  Медицинские работники, имеющие контакт  с кровью. Относительно меньшее значение имеют половой, бытовой и вертикальный пути передачи, что связано с низкой виремией ВГС.

1

Инкубационный период длится в среднем 6-8 недель с возможными колебаниями от 2-4-х недель до 4-6 месяцев  больше. В конце инкубационного периода повышаются  уровни печеночных трансаминаз (превышают норму в 5-30раз).  Сероконверсия наступает через 15-20 недель от момента заражения. На 3-4 недели раньше анти-ВГС-IgG обнаруживается анти-ВГС-IgM. РНК вируса с помощью ПЦР определяется через 1-3 недели после инфицирования.

Лабораторная диагностика гепатита С основана на обнаружении в образцах сывороток крови человека специфических маркеров вируса гепатита С: антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M, а так же нуклеиновой кислоты возбудителя (РНК  ВГС).

В диагностической лаборатории СПИД ГБУЗ «ООКСПК» проводится обследования на наличие АТ   класса JgG и JgМ  к вирусу гепатита С: к структурным антигенам (НСV-core-Ag) и неструктурным (НСV-NS3-Ag, HCV-NS4-Ag, HCV-NS5-Ag).

1

Забор крови производится  ежедневно, кроме субботы и воскресенья, в процедурном кабинете Центра крови с 8.00 до 12.30 часов при наличии паспорта. Результат анализа – на следующий день после 14.00. Если Ваш результат задержан, то срок его исполнения переносится на 3 рабочих дня.

Гепатит В

1

Гепатит В (ГВ) — является одним из самых распространенных и опасных вирусных инфекционных заболеваний человека, что обусловлено высокой устойчивостью возбудителя во внешней среде и широким спектром клинико-эпидемиологических особенностей.

Вирусный гепатит В- инфекционное заболевание, которое характеризуется тяжелым воспалительным  поражением печени. Источниками возбудителя инфекции являются больные острыми и хроническими формами болезни, а также  лица с субклиническим  течением инфекционного процесса и здоровые носители.

ГВ передается через кровь и контактным,  преимущественно половым путем. Большому риску подвергаются медики, имеющие контакты с кровью. Вирус может передаваться от матери к ребенку во время беременности или непосредственно при родах.

Лабораторная диагностика ГВ основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

  • HBsAg
  • анти-НВs
  • анти-НВс класса IgM и IgG
  • HВe-Ag-антиНВе
  • ДНК | ВГВ

В диагностике ГВ наиболее широко используется определение HBsAg.    HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В, основной маркер острого и хронического гепатита В- представляет собой белковую молекулу, ответственную за адсорбцию вируса на поверхности гепатоцитов. После встраивания вируса в геном печеночных клеток они начинают продуцировать вирусную ДНК и белки, и новые молекулы HBsAg поступают в кровь.

1

Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании. При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. 

Обнаружение поверхностного антигена вируса гепатита В в крови больше 6 месяцев от начала болезни указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация HBsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются- анти-НВс класса IgM, НвеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений или при обострении. HВcAg  выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредованно его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела- анти-НВс класса IgM и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgM является дополнительным маркером этого заболевания. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением HBsAg и образованием анти-HBs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Тестирование НВеАg проводят в сыворотках крови только с наличием HBsAg и позитивный результат данного маркера свидетельствует об активном процессе — либо подтверждает диагноз острого ГВ, либо свидетельствует об обострении хронического ГВ. Наличие ДНК-ВГВ( наиболее чувствительный маркер продолжающейся репликации ВГВ) в сыворотке крови указывает на высокую инфекционность  данного образца и активное размножение вируса в организме. Высокая активность аминотрансфераз сыворотки отражает  воспалительное  повреждение ткани печени. Сероконверсия  HBsAg в анти-HBs происходит у 90-95% больных с острым ГВ в стадии разрешения инфекционного процесса и, является показателем иммунитета к вирусу ГВ, то есть наличие анти-HBs свидетельствует о перенесенной инфекции и наличии иммунитета к этой инфекции. Лица, имеющие эти антитела в защитной концентрации(10МЕ и более), не болеют ГВ и не нуждаются в вакцинации.

Забор крови производится  ежедневно, кроме субботы и воскресенья, в процедурном кабинете Центра крови с 8.00 до 12.00 часов при наличии паспорта. Результат анализа – на следующий день после 14.00. Если Ваш результат задержан, то срок его исполнения переносится на 3 рабочих дня. 

Сифилис

1

Сифилис – хроническое инфекционное заболевание, вызываемое Treponemapallidum (бледная трепонема),  характеризуется  полиорганным  поражением и стадийным течением. 

Treponemapallidum относится к семейству Spirochaetaceae, роду Treponema. Имеет спиралевидную форму с завитками, грамотрицательный анаэроб. Сифилис , как правило передается половым путем, а важнейшим фактором проникновения бледных трепонем в организм и его инфицирования является нарушение целостности кожных и слизистых покровов и большое количество вирулентных возбудителей. Трансплацентарное заражение или инфицирование новорожденных через родовые пути больных сифилисом матерей, а также при кормлении грудью представляет серьезную опасность и диктует необходимость  обследования.

Инкубационный период длится 3-4 недели, первичный серонегативный -1 месяц, затем первичный серопозитивный -1 месяц, затем вторичный период-2-4 года, далее третичный период. В первичном периоде возникает твердый шанкр( безболезненная язва в месте проникновения бледной трепонемы), сопровождающийся регионарным лимфаденитом. В конце первичного периода шанкр самостоятельно заживает, а лимфаденит переходит в полиаденит и сохраняется до пяти месяцев. Началом вторичного периода являются  генерализованные  высыпания ( пятнистые, папулезные, пустулезные сифилиды). На втором полугодии вторичного сифилиса исчезает полиаденит. Появление третичных сифилидов (бугорков и гумм) знаменует начало третичного периода, который наступает  у  40% нелеченных и неполноценно леченных больных. Волны третичного периода разделены более продолжительными периодами латентного течения инфекции. В третичных сифилидах содержится крайне мало трепонем, поэтому они практически не заразны. Передача сифилиса потомству наиболее вероятна в первые три года заболевания. В результате возникают поздние выкидыши (на 12-16 неделе), мертворождение. Ранний и поздний врожденный сифилис. Проявления раннего врожденного сифилиса возникают сразу после рождения и аналогичны проявлениям вторичного сифилиса.

Диагноз сифилиса должен быть подтвержден лабораторными исследованиями, однако, при отрицательном результате скринингового теста обследование пациента с существующим риском недавнего заражения сифилисом следует повторить через 1-2 недели. Образцы, давшие положительный результат в тест-системе для выявления суммарных антител, необходимо проанализировать в системах, выявляющих  конкретные классы иммуноглобулинов(JgG и IgM). Положительный результат на JgG и IgM является подтверждением положительного результата, полученного в скрининговом тесте, и свидетельствует о наличии специфических антитрепонемных антител.

1

Забор крови производится  ежедневно, кроме субботы и воскресенья, в процедурном кабинете Центра крови с 8.00 до 12.00 часов при наличии паспорта. Результат анализа – на следующий день после 14.00. Если Ваш результат задержан, то срок его исполнения переносится на 3 рабочих дня. 



Источник: gbuzrkck.ru