Электрофорез белков сыворотки

Тема – Исследование показателей белкового обмена.

Практическое занятие. «Обмен белков. Электрофорез белков сыворотки крови»

Учебные вопросы для самоподготовки студентов:

1. Характеристика альбуминов сыворотки крови: молекулярная масса, строение, растворимость в воде, место синтеза, биологическая роль.

2. Общая характеристика фракций глобулинов сыворотки крови: молекулярная масса, строение, растворимость в воде, место синтеза, биологическая роль.

3. Представители отдельных классов глобулинов и их характеристика:

· α1-глобулины (α1-антитрипсин, α1-кислый гликопротеин или орозомукоид , α-липопротеины, α1-фетопротеин и др.).

· α2-глобулины (α2-макроглобулин, гаптоглобин, церулоплазмин и др.)

· β-глобулины (трансферрин, С3 и С4-компоненты системы комплемента, β-липопротеины, гемопексин, С-реактивный белок и др.)

· γ-глобулины (иммуноглобулины IgG, IgА, IgМ, IgD, IgE).

4. Белки острой фазы воспаления. Характеристика С-реактивного бела. КДЗ.

5. Онкобелки. КДЗ.

Тема для реферативного сообщения: «Онкомаркеры. Методы исследования.»

На занятии студенты пишут закрепляющий тест по новому материалу.

 

Самостоятельная работа студентов: а) конспектирование методического пособия; б) расчет белковых фракций по результатам электрофореза; в) анализ протеинограмм.

Литература: Кухта В.К. и соав. Основы биохимии. М., Медицина, 2007, с.294-300, 392-393. Пустовалова Л.М. Основы биохимии для мед. Колледжей. Ростов н/Д: Феникс, 2004. С.251-256. Пустовалова Л.М. Практические работы по биохимии. Ростов н/Д. 2004. с.38-41.

 

Задачи для повторения материала по физико-химическим свойства белков

Задача 1.

В биохимической лаборатории исследуется электрофоретическая подвижность белков. Задание.Предскажите, в каком направлении будут двигаться в электрическом поле (к катоду, аноду или останутся на старте) при рН буфера 7,0 следующие белки: А) миоглобин, рI=7,0. Б) β-лактоглобулин, рI=5,2. В) химотрипсиноген, рI=9,5.

 

Задача 2. В биохимической лаборатории исследуют белки электрофо-ретическим методом. Задание. При каком значении рН буфера будет достигнуто наиболее эффективное разделение методом электрофореза белковой смеси сывороточного альбумина (изоэлетрическая точка, рI=4,9) и химитрипсиногена (рI=9,5)? Какой суммарный заряд будет иметь каждый из белков при оптимальном значении рН? В каком направлении (к катоду или аноду) будет передвигаться каждый из белков при электрофорезе?

Методическое пособие для студентов

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ:

Конспектирование, выполнение расчетов, решение проблемных задач.

План самостоятельной работы:

1. Принцип метода электрофореза.

2. Этапы проведения электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке.

3. Оценка результатов электрофореза:

· метод элюирования, расчет содержания белковых фракций; выполнить расчет: 1) процентного содержания белковых фракций; 2) абсолютного содержания (г/л) белковых фракций.

· метод денситометрии, расчет содержания белковых фракций; зарисовать электрофореграмму здорового взрослого человека.

4. Нормальные величины содержания белковых фракций (сделать конспект)

5. Диагностическое значение электрофоретического разделения белков
сыворотки крови.

6. Основные типы протеинограмм.

7. Анализ протеинограмм. Решение проблемных задач.

Электрофорез белков сыворотки крови

Принцип метода. В постоянном электрическом поле белки сыворотки крови движутся со скоростью, зависящей от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц. В качестве поддерживающих сред-носителей используют: хроматографическую бумагу, ацетатцеллюлозные пленки (мембраны), крахмаловые, агарозные и полиакриламидные гели. В буферном растворе с рН=8,6 или 8,9 все белки сыворотки крови приобретают отрицательный заряд и движутся от катода к аноду, причем дальше всего уходят альбумины, имеющие меньшую молекулярную массу, затем располагаются α1-, α2-, β- и γ-глобулины.

Требования к подготовке пробы к анализу: использовать свежую сыворотку крови, хранившуюся не более нескольких часов; не должно быть следов гемолиза.

Системы для электрофореза: используют ручные, полуавтоматические и автоматические (устройство для электрофореза УЭФ-01-«Астра», аппарат для ЭФ «DS-2» («Кормэй»), система «Парагон» фирмы «Бекман» (США), автоматические электрофоретические анализаторы SAS-1 Рlus/SAS-2 (Helеna Biosciences, Великобритания). В настоящее время широкое использование находит капиллярный электрофорез.




Источник: megapredmet.ru